Обзор прессы

20.06.2011

Новые возможности приготовления фильтрованной эритроцитной взвеси

А. В. Нечеткий, А. В. Данилова, Г. П. Игнатович, В. И. Ващенко, И. В. Плугарева, И. И. Кробинец ФГВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ, г. Санкт-Петербург

Ключевые слова: лейкофильтрация, эритроцитная взвесь в ресуспендирующем растворе, лейкоцитарный фильтр Keywords: leucocyte filtration, red cells in additive solution, leucocyte filter

Производство безопасных гемотрансфузионных сред составляет неотъемлемую часть профилактиче­ских мер по предупреждению посттрансфузионных осложнений [1, 8]. В службе крови России с 2000 года применяются отечественные устройства для удаления лейкоцитов из донорской крови и других эритроци-тарных сред УЛЛ-01 «Интероко», отличающиеся вы­соким коэффициентом фильтрации, но имеющие не­которые технологические особенности применения. В настоящее время в службе крови используются уст­ройства для удаления лейкоцитов и получения без-лейкоцитных компонентов консервированной крови «Лейкосеп», предназначенные для фильтрации эрит-роцитной массы и плазмы [2]. Между тем, наилучшими биологическими свойствами обладает эритроцитная взвесь (ЭВ), которая широко используется в трансфу-зиологической практике [5, 6]. Однако возможности использования отечественного лейкофильтра «Лейкосеп» для приготовления фильтрованной ЭВ, ресуспен-дированной в взвешивающем растворе типа SAGM, не исследованы.

Целью работы явилось исследование возмож­ностей получения лейкофильтрованной эритроцит-ной взвеси с помощью устройства «Лейкосеп».

Материал и методы исследования. Были иссле­дованы медико-технические показатели производст­ва и качественный состав 62 доз лейкофильтрованных компонентов крови, полученных от доноров резерва. Для разделения консервированной крови на компо­ненты использовали рефрижераторные центрифуги Sorvall RC - ЗС Plus («Kendro-Sorvall», США) и Jouan KR 4i («Jouan», Франция). Заготовку крови осуществ­ляли в счетверенные гемоконтейнеры «Грин Кросс» (Корея) или строенные гемоконтейнеры «Teruflex blood bag» («Terumo», Япония), содержащих взвеши­вающий раствор SAGM, по методике, рекомендованной производителями контейнеров. Для приготовле­ния фильтрованной эритроцитной взвеси (ЭВф) ис­пользовали «Комплект устройств полимерных для удаления лейкоцитов и получения безлейкоцитных компонентов консервированной крови однократного применения, стерильный, «Лейкосеп» (ЗАО «НПП «Интероко», Россия). Фильтрацию проводили не по­зднее 18 ч с момента заготовки крови. Контейнеры с фильтрованными компонентами крови паспортизи­ровали и хранили в соответствии с инструкцией произ­водителя. Образцы ЭВф были разделены на 3 группы в зависимости от особенностей методики проведения фильтрации. Отличительными особенностями мето­дики лейкофильтрации с помощью устройств «Лей­косеп» являлось использование эритроцитной взвеси (ЭВ) в ресуспендирующем растворе вместо эритроцит­ной массы в предложенных нами вариантах: 1 группа образцов - фильтрация по стандартной методике с предварительно разделенными плазмой и ЭВ; в части исследований из предварительно разделенной ЭВ удаляли лейкотромбоцитарный слой (ЛТС) (2 группа образцов); 3 группа образцов - осуществляли фильт­рацию ранее приготовленной ЭВ (модифицированная методика). Согласно указанным методикам хранение фильтрованной ЭВ осуществляли в течение 42 дней. На этапе лейкофильтрации трансфузионных сред изучали медико-технические параметры технологии получения гемокомпонентов, включающие время, ско­рость фильтрации, объем полученного гемокомпонен-та, время, затраченное на необходимые сопутствующие операции при фильтрации, потери трансфузионной среды в фильтре и магистралях. В гемокомпонентах определяли гематокрит, содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, степень гемо­лиза и содержание свободного гемоглобина с помощью унифицированных методов. Подсчет количества ос­таточных лейкоцитов в фильтрованной ЭВ осуществ­ляли с помощью гемоцитометра Nageotte по модифи­цированной методике Е. А. Перфильевой и соавт. [3].

Результаты и их обсуждение. При исследовании возможности фильтрации ЭВ устройством «Лейкосеп» по модифицированной методике и анализе результа­тов хронометрирования установлено, что время фильтрации ЭВ не зависело от предварительного уда­ления ЛТС (табл. 1).

Потери среды не зависели от предварительного удаления ЛТС и составляли 11 % от исходного объема ЭВ. Закономерно, что объем ЭВ, содержащей ЛТС, после фильтрации был выше на 9 % по сравнению с ЭВ, у которой ЛТС был удален.

Анализ гематологических показателей ЭВ при фильтрации устройством «Лейкосеп» установил, что при модифицированной методике гематокрит компо­нента был выше на 13-24 % по сравнению с ЭВ, при­готовленной по стандартной методике (табл. 2).

При этом величина гематокрита в фильтрован­ной ЭВ не зависела от наличия или отсутствия ЛТС в фильтруемом компоненте. Концентрация гемогло­бина при модифицированной методике была выше в 1,2-1,3 раза по сравнению с ЭВ, фильтрованной по методике с предварительной фильтрацией плазмы.


Содержание гемоглобина в фильтрованной ЭВ, при­готовленной с помощью «Лейкосеп» по модифициро­ванной методике, было на 10 % больше по сравнению с ЭВ, фильтрованной без удаления ЛТС. Удаление ЛТС не оказывало влияния на содержание свободно­го гемоглобина и степень гемолиза фильтрованной ЭВ при стандартной методике фильтрации. При фильтрации по модифицированной методике содер­жание свободного гемоглобина было выше в 1,6 раза по сравнению с компонентами, приготовленными по стандартной методике без удаления ЛТС (р < 0,05).

Таблица 1

Медико-технические показатели технологии фильтрации эритроцитной взвеси с помощью устройства «Лейкосеп»


 

Показатели

ЭВ с удален­ным ЛТС

ЭВ без уда­ления ЛТС

Время фильтрации, мин

Объем компонента до фильтрации, мл 

Объем компонента после фильтрации, мл

Потери эритроцитной взвеси во время фильтрации, мл  

38,3 + 10,1

317,5 + 12,5  

290,0 ± 10,0

 

35,0 + 2,9  

36,6 + 4,1

346,2 + 6,5*  

310,0 ± 6,5*

 

38,6 + 4,0  

 

Примечание:* Различия достоверны между группами (p<0,05)

Таблица 2

Гематологические показатели фильтрованной

эритроцитной взвеси с помощью устройства «Лейкосеп»

по различным методикам

 

 

 

 

Показатели

Фильтрованная эритроцитная взвесь

Стандартная методика

Модифицированная методика

Удаление ЛТС

Без удаления ЛТС

Гематокрит, л/л

Концентрация гемоглобина, г/л  

0,58 + 0,06

185,7 ± 16,7  

0,51 ± 0,02

170,1 ± 7,2*  

0,67 + 0,01**

223,4 ± 5,7**  

Содержание гемоглобина, г/доза

54,2 + 6,5  

52,8 + 2,7

58,7 + 2,5**

Содержание свободного гемоглобина, г/л

0,25 + 0,01

0,22 ± 0,03

0,33 ± 0,03**

Степень

гемолиза, %

0,056 ± 0,021

0,063 ± 0,021

0,049 + 0,011

Концентрация эритроцитов,

*1012

6,02 ± 0,13

5,56 ± 0,22

6,54 + 0,35

Концентрация лейкоцитов, х106

1,40 + 0,11

1,87 + 0,18*

2,07 ± 0,52

Содержание лейкоцитов, х106/доза

0,383 + 0,036

0,565 ± 0,064

0,551 + 0,146

Содержание тромбоцитов, х109/доза

3,13 + 0,01

6,78 + 0,58

2,14 ±0,52*

Примечание:* Различия достоверны между ЭВф и ЭВф с предварительно удаленным ЛТС (p<0,05); ** различия достоверны между ЭВ, фильтрованной по стандартной и модифицированной методике (p<0,05)

 

 

 

 

ответственно, а в случае использования модифициро­ванной методики - в 2,1 и в 3,7 раз по сравнению с показателем соответствующих компонентов первых суток хранения (1 группа образцов). К 21-м суткам хранения степень гемолиза в ЭВф, приготовленной с помощью модифицированной методики (3 группа образцов), была в 1,9 раз ниже, к 42-м суткам хране­ния - на 35 % ниже по сравнению с ЭВф, приготов­ленной по стандартной методике без предваритель­ного удаления ЛТС (1 группа образцов).

Проведенный бактериологический контроль не выявил контаминации микроорганизмами ЭВф на протяжении всего срока хранения (42 суток).

Полученные данные показали, при некоторой схожести значений медико-технических показателей процесса фильтрации эритроцитой массы, приведен­ных нами ранее [4], и ЭВ с использованием устрой­ства «Лейкосеп», имеются и определенные различия. Прежде всего, обращает на себя внимание более низкая скорость фильтрации ЭВ по сравнению с эритроцитной массой. При этом потери компонента не превышали принятых для таких технологий значений [7]. Обоснованием возможности положительного исполь­зования предлагаемой нами модифицированной мето­дики фильтрации приготовленной ЭВ без предвари­тельного пропускания плазмы через фильтр «Лейкосеп» может служить более низкий гематокрит и лучшие ре­ологические свойства ЭВ по сравнению с эритроцитной массой, что позволяло фильтровать компонент через «сухой» фильтр. Это расширяет возможности применения устройства «Лейкосеп» для фильтрации эритроцитосодержащих компонентов.

Степень элиминации лейкоцитов при фильтра­ции ЭВ с применением «Лейкосеп» несколько выше, чем при использовании эритроцитной массы [4] и приближена к значениям, полученных с использова­нием некоторых зарубежных фильтров [9].

Таким образом, использование устройства «Лейкосеп» позволяет получать обедненную лейко­цитами ЭВ, отвечающую требованиям стандартов ка­чества и имеющую срок хранения до 42 дней.


Резюме: Были исследованы медико-технические параметры предложенной методики приготов­ления эритроцитной взвеси с использованием лейкофилыпра «Лейкосеп» и гематологические показа­тели фильтрованного гемокомпонента. Установлено, что потери компонента при фильтрации не пре­вышали 11 % от его исходного объема. Показано, что использование устройства «Лейкосеп» позволяет получать обедненную лейкоцитами эритроцитную взвесь, соответствующую требованиям стандар­тов качества на протяжении срока хранения до 42 дней.

Abstract: Medico-technical parameters of the offered technique of preparation of red cells in additive solution with use the leucocytes filter «Leikosep» and hematological parameters of filtered blood component were investigated. It is established, that losses of a component during filtration did not exceed 11 %from its initial volume. It is shown, that use of device «Leikosep» allows to receive leucocyte-depleted red cells in additive so­lution, which is appropriate to the requirements of the quality standards during a period of storage about 42 days.


Список литературы

1.       Литманович К. Ю., Селиванов Е. А., Дуткевич И. Г., Солдатенков В. Е. Проблемы безопасности и
эффективности гемотрансфузионной терапии // Эфферентная тер. - 2004. - Т. 10, № 3. - С. 37-47.

2.       Мельникова В. Н., Селиванов Е. А., Плеша­ков В. Т. Новый эффективный метод лейкодеплеции
эритромассы и плазмы консервированной крови // Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии. -
СПб., 2004. - С. 159.

3.       Перфильева Е. А., Плеская Л. Г., Фокина Т. В., Калинин Н. Н. Совершенствование подсчета клеток в компонентах крови // Гематол. и трансфузиол. - 2003. -№ 2. - С. 44-47.

4.       Чечеткин А В., Пугина Н. В., Кононенко С. Н., Касьянов А. Д., Ващенко В. И., Лаптев В. В., Данилова А. В.
 Влияние лейкофильтрации на качество эритроцитных гемокомпонентов // Вестн. службы крови России. - 2006. - № 3. - С. 45-48. 

5.        Hess J. R., Rugg N., Joines A. D., Gormas J. F., Pratt P. G., Silberstein E. В., Greenw T. J. Buffering and dilution in red blood cell storage // Transfusion. - 2006. - Vol. 46, № 1. - P. 50-52,

6.        Hogman C. F., Meryman H. T. Red blood cells in­tended for transfusion: quality criteria revisited // Transfusion. - 2006. - Vol. 46, № 1. - P. 137-141.

7.        Shinar E., Prober G., Yahalom V., Michlin H. WBC filtration of whole blood after prolonged storage at ambient temperature by use of an in-line filter collection system Transfusion. - 2002. - Vol. 42, № 6. - P. 734-740.

8.        Taylor C, Navarette C, Contreras M. Immuno- logical complications of blood transfusion // Transf. alt. transf. med. - 2008. - Vol. 10. - № 3. - P. 112-126.

9.        Yomtovian R., Gernsheimer Т., Assmann S. F., Mohandas K., Lee Т., Kalish L. A., Busch M.P. WBC reduction in RBC concentrates by prestorage filtration: multi-center experience // Transfusion. - 2001. - Vol. 41, № 8. - P. 1030-1036.


Контактная информация

Чечеткин Александр Викторович - д. м.н., профессор ФГВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ, г. Санкт-Петербург.

Тел. 8-950-017-15-38.